细胞培养宝典

细胞培养是不是让你又爱又恨？爱它的神奇，恨它的“坑”多。

????一、复苏细胞：快融是关键！

复苏细胞的时候，一定要快！快！快！目的是防止小冰晶变成大冰晶，也就是防止冰晶的重结晶。冻存细胞从液氮中拿出来后，立即放入37℃水浴中，轻轻摇晃，1分钟内全部融化（千万不要超过3分钟哦）。融化后的细胞可以直接接种到含有完全培养液的培养瓶中，24小时后再换新鲜培养液，去除DMSO。

????二、更换培养基：慎重行事！

细胞培养过程中，如果细胞增殖和形态正常，最好不要更换培养基。细胞都有自己的“脾气”，突然换培养基可能会让它们不适应，甚至死亡。但如果必须换，可以尝试半换，让细胞慢慢适应新的培养基。如果是贴壁细胞，直接吸掉旧培养液，加入新的就行；如果是悬浮细胞，就需要低速离心，吸掉上清液，再加入新的培养液。

????三、更换胎牛血清：品质很重要！

胎牛血清是细胞培养中的重要营养来源，所以它的品质对细胞生长影响很大。如果细胞培养没有异常，不建议随意更换血清品牌。如果必须更换，最好先用一批细胞做预实验，确保细胞能够正常生长。

????四、收到细胞后：先观察再操作！

收到细胞后，先不要急着开盖，放在培养箱静置一会儿，然后在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并拍照记录。如果细胞没有异常，贴壁细胞未超过80%汇合度时，吸出部分培养液，留下10ml继续培养；超过80%汇合度时，按细胞培养条件传代培养。悬浮细胞则需要离心，吸掉上清液，用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。

????五、换液时机：看细胞密度！

换液的时机主要看细胞生长密度，或者按照细胞株的基本数据上的更换时间来。一般来说，细胞生长到一定密度时，就需要更换新鲜培养基了。记得按时换液，保持细胞生长环境的稳定哦！

????六、培养基加抗生素：谨慎使用！

正常情况下，培养基中不应添加抗生素，除非是特殊筛选系统。新手或者担心污染的宝子们，可以适量添加抗生素，但要注意抗生素本身也有毒性，对细胞可能有伤害。所以，尽量在无菌环境下操作，减少污染风险哦！

????七、避免污染：无菌操作是关键！

细胞培养中最怕的就是污染。主要还是考虑无菌环境，做好操作台的灭菌，别把培养基滴落在生物安全柜的入风口，也别在培养箱里把培养基打翻。一旦出现污染，能救的就用抗生素救一下，但一般情况下，还是建议扔掉，避免交叉感染哦！

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