Fura-2,AM,Cell Permeant 结合乙酰氧甲酯可提高细胞渗透性
Fura-2的生产厂商是西安强化生物科技,是细胞生物学常用的一种钙荧光探针,能特异性地结合Ca2+。
同时可发出荧光,其发射荧光强度与结合Ca2+的浓度存在定量关系。
由于Fura-2是极性大的酸性化合物,无法进入细胞内,为此在其负性基团上结合乙酰氧甲酯,使其成为Fura-2/AM。
该变化既增加了酯溶性又消除了负电荷,提高了细胞渗透性。在细胞内,Fura-2/AM被酯酶水解成Fura-2后可与胞浆游离Ca2+可逆性结合。
️试剂性质和应用
1.Fura-2/AM储存液的配制
利用无水DMSO溶解Fura-2/AM配制成2-5 mM的储存液,该储存液可分装于-20℃避光干燥密封保存,最长可保存6个月,但是避免反复冻融,建议分装保存。每次使用前需回温至室温。
2.Fura-2/AM工作液的配制
利用缓冲液将Fura-2/AM稀释成2-20μM的工作液,并添加0.04% Pluronic F-127和有机阴离子转运抑制剂probenecid(0.5 - 1 mM)。
3.取出预培养的细胞,除去培养基,使用缓冲液洗涤细胞3次。
4.将Fura-2/AM工作液加入细胞,加入量以覆盖细胞为准。在37℃培养30 - 60 min。
5.用缓冲液(如HHBS)洗涤细胞3 次,以去除残留的Fura-2/AM工作液。然后加入缓冲液覆盖细胞。
6.数字成像显微镜检测细胞。
注:某些细胞具有自体荧光会影响结果分析,需使用未加载探针细胞做对照,在结果分析时在同一波长下扣除自荧光。
试剂信息英文名称:Fura-2,AM,Cell Permeant
中文名称:荧光钙探针 Fura 2-AM
其他名称:Fura-2,Acetoxymethyl Ester;
CAS NO:108964-32-5
分子式:C44H47N3O24
分子量:1001.86
外观:黄色粉末
Ex/Em:363/512 nm(Ca2 +-free),335/505 nm(Ca2+-saturated)
熔点:>250℃
沸点:975.9±75.0 °C
密度:1.400±0.06 g/cm3
溶解性:溶于DMSO(1~5mM)
纯度:≥95%
储存条件:-20℃避光干燥
强化生物结构式Fura-2,AM,Cell Permeant 钙离子荧光探针,超级纯;Fura-2,Acetoxymethyl Ester;紫外光激发Ca2+荧光探针;比率测定型( ratiometric fluorescent dye);Fluo-3;Indo-1,AM;CAS NO:108964-32-5;
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