热休克蛋白90（HSP-90）定量检测试剂盒（ELISA）｜茁彩生物
【指标介绍】
Hsp90的分子量大小约为90 kDa，它普遍存在于除古细菌外的原核和真核细胞中，是热休克蛋白家族核心成员之一。正常细胞中Hsp90含量为细胞总蛋白的1-2%，当细胞处于压力环境下，上升到4-6%。此外，Hsp90在进化上非常保守，它的功能在不同种属来源的细胞中保持一致。
Hsp90共包含五个亚家族成员：Hsp90A（主要分布在细胞质中，人源的胞质Hsp90包含α、β两种亚型），Trap（存在于线粒体），Hsp90B（如Grp94，内质网特有），Hsp90C（叶绿体Hsp90），Htp G（细菌中的Hsp90）。研究表明细胞质中的Hsp90β是组成型表达蛋白，非应激状态含量较高，但是只能被少量诱导；而Hsp90α为诱导型蛋白，正常状态下低表达，但在压力环境中高表达。
Hsp90的功能广泛，由它辅助完成结构活化过程的底物蛋白质（又称为“客户蛋白”）共约有300种，包括凋亡因子、蛋白激酶、转录因子以及信号通路蛋白等，其中一些客户蛋白质如激素受体、表皮生长因子受体家族蛋白、间质上皮细胞转换蛋白、Raf、AKT、p53与细胞周期蛋白激酶等。
【预期用途】
仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中热休克蛋白90(HSP-90)的浓度。
实验原理
本试剂盒采用竞争法酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗热休克蛋白90(HSP-90)抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入热休克蛋白90(HSP-90)校准品和待测样本，再加入HRP标记的热休克蛋白90(HSP-90)抗原（酶标抗原），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-酶标抗原的免疫复合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪450nm波长上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中热休克蛋白90(HSP-90)的浓度负相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中热休克蛋白90(HSP-90)的浓度。
试剂盒组分与保存
未开封的试剂盒保存在2-8度，不得使用过期试剂盒。
标准品 （冻干品）：试剂盒提供了已知浓度的6支标准品:
样品的采集和储存
以下只是列出样品采集和保存的一般指南。所有样本采集保存过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。
- 细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反复冻融。
- 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在-20℃以下，避免反复冻融。
- 血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。
- 样本收集后，无法一次检测完毕，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。
- 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01 M,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1: 9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9 mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎或反复冻融。最后将匀浆液5000×g离心 5-10分钟，取上清检测。
- 细胞提取液：贴壁细胞用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5分钟后收集细胞；悬浮细 胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每 1×106 个细胞中加入150-200μLPBS重悬并通过反复冻融使细胞破碎(若含量很低可减少PBS的体积)。将提取液于1500×g离心10分钟，取上清检测。
- 其他生物体液：1000×g 离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
