ALA-ALA-PHE-CHLOROMETHYLKETONE TFA ；102129 - 66 - 8；AAF

一、基本信息

• ️英文名称：ALA-ALA-PHE-CHLOROMETHYLKETONE TFA ，也可写为 (2S)-2-amino-N-((2S)-2-(((2S)-4-chloro-3-oxo-1-phenylbutan-2-yl) amino) propanoyl) propanamide
• ️中文名称：三氟乙酸 - L - 丙氨酰 - L - 丙氨酰 - L - 苯丙氨酰氯甲烷，或三氟乙酸 - 丙氨酰 - 丙氨酰 - 苯丙氨酰氯甲基酮
• ️氨基酸序列：Ala-Ala-Phe
• ️单字母序列：AAF
• ️三字母序列：Ala-Ala-Phe
• ️分子量：339.817（不考虑三氟乙酸盐时），若为三氟乙酸盐形式，分子量约为 453.8（不同文献略有差异 ）
• ️分子式：C₁₆H₂₂ClN₃O₃（不考虑三氟乙酸盐时 ），三氟乙酸盐形式分子式可表示为 C₁₆H₂₂ClN₃O₃・CF₃COOH（具体以更精准的文献数据为准）
• ️等电点：暂无公开数据
• ️CAS 号：102129 - 66 - 8

二、结构信息

它是由三个氨基酸（丙氨酸 - 丙氨酸 - 苯丙氨酸）组成的短肽，末端连接有氯甲基酮结构，这种结构使得它具有抑制酶活性的能力。其中，氯甲基酮基团的氯原子具有较高的反应活性，能够与酶活性中心的特定氨基酸残基发生共价结合，从而不可逆地抑制酶的活性。氨基酸之间通过肽键相连，形成特定的线性结构，而苯丙氨酸的芳香环结构赋予了整个分子一定的疏水性 。

三、作用机理及研究进展

• ️作用机理：AAF-CMK 是一种不可逆的三肽基肽酶 II（TPPII）抑制剂，常用于 10 - 100μM 的浓度。TPPII 是一种丝氨酸肽酶，可从寡肽的游离 NH₂末端去除三肽，参与细胞内蛋白质的降解过程。AAF-CMK 通过与 TPPII 活性位点的丝氨酸残基发生共价结合，从而抑制 TPPII 的活性。此外，当使用浓度为 50μM 时，它还能抑制博来霉素水解酶和嘌呤霉素敏感的氨肽酶，但对蛋白酶体的胰凝乳蛋白酶样活性没有显著干扰。在细胞水平，研究发现它能诱导细胞凋亡，通过内在途径激活 caspase 9 和 caspase 3，进而导致细胞死亡 。
• ️研究进展：目前对于 AAF-CMK 的研究主要集中在其作为抗癌药物的潜在应用方面。有研究表明，它在体外对白血病 U937 细胞具有细胞毒活性，可诱导细胞凋亡、自噬和蛋白质聚集，有望成为潜在的抗癌剂。同时，也有研究关注其在蛋白质稳态调控中的作用，探索 TPPII 被抑制后对细胞内蛋白质代谢和细胞生理功能的影响 。

四、溶解保存

• ️溶解：可参考相关实验手册，尝试溶解在合适的有机溶剂如 DMSO 中，具体溶解度数据可能因实验条件不同而有所差异。
• ️保存：粉末状态下，-20°C 可保存 3 年 ，4°C 可保存 2 年；溶解在溶剂中时，-80°C 可保存 6 个月 ，-20°C 可保存 1 个月 ，需密封储存，避免光照和水分影响。

五、相关多肽

与一些其他具有酶抑制活性的多肽类似，如某些丝氨酸蛋白酶抑制剂多肽，它们都通过与靶酶的活性位点结合来发挥抑制作用，但具体的作用机制和靶酶特异性可能有所不同。例如，一些针对胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶的抑制多肽，虽然也是作用于丝氨酸蛋白酶，但它们的氨基酸序列和结构与 AAF-CMK 不同，对不同酶的亲和力和抑制效果也存在差异 。

六、相关文献

[1] Glas R, Bogyo M, McMaster JS, Gaczynska M, Ploegh HL. Tripeptidyl peptidase II: a major cytosolic protease. Nature. 1998 Mar 19;392(6673):618-22.

[2] Geier E, Pfeifer G, Wilm M, Lucchiari-Hartz M, Baumeister W, Eichmann K, Niedermann G. Tripeptidyl peptidase II is a 1.5-MDa serine protease with a unique mode of substrate cleavage. Science. 1999 Feb 19;283(5404):978-81.

[3] Wojcikiewicz E, Drozdzik M, Kaminska B, Wlodkowic D, Szumilo T, Stoklosa T, Klinger M, Golab J, Stankiewicz M. Semispecific TPPII inhibitor Ala-Ala-Phe-chloromethylketone (AAF-cmk) displays cytotoxic activity by induction of apoptosis, autophagy and protein aggregation in U937 cells. Leuk Res. 2010 Sep;34(9):1200-8.

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