【百欧泰生物】多糖NMR分析：探秘多糖结构密码

多糖NMR分析，即利用核磁共振（NMR）技术对多糖结构和组成进行研究。多糖是由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的生物大分子，结构复杂。NMR技术通过检测多糖中原子核的磁性信号，来解析多糖的精细结构，如单糖组成、糖苷键连接方式等。在食品、医药等领域应用广泛，像分析食品中多糖成分、研究药用多糖活性机制。其优势显著，无需对样品进行衍生化，不破坏样品，能在接近生理条件下分析，且可提供多糖结构的定量和定性信息。

️实验方法

️以附子多糖的NMR分析为例

1. 样品准备

1.1 提取：取150克干燥的附子实体粉末，采用热水浸提法，在90℃条件下，按照料液比1:25（g/mL）进行提取，共提取4次，每次2.5小时，之后合并提取液。

1.2 纯化：将提取液减压浓缩，加入4倍体积的95%乙醇进行沉淀，在4℃下静置12小时，然后5000转/分钟离心15分钟收集沉淀。将沉淀重新溶解在适量蒸馏水中，通过DEAE-52纤维素柱，依次用蒸馏水、0.1mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L的NaCl溶液进行梯度洗脱，收集目标多糖洗脱液。最后将洗脱液装入透析袋，在蒸馏水中透析48小时，每4小时换一次水，透析结束后冷冻干燥，得到约7克附子多糖样品。

2. 配制溶液

准确称取60mg附子多糖样品，溶解于0.6mL重水（D2O）中，充分搅拌均匀后转移至5mm NMR样品管。

3. NMR测定

3.1 氢谱（¹H NMR）：设置仪器频率为400MHz，扫描范围0-10ppm，累加次数为64次，脉冲宽度设置为45°，进行测定，从而获取附子多糖中氢原子的化学位移、耦合常数等数据。

3.2 碳谱（¹³C NMR）：扫描范围设为0-220ppm，累加次数2000次，脉冲宽度90°，测定获取多糖碳骨架相关信息。

4. 数据分析

依据得到的谱图，分析化学位移、峰面积等数据。

️提高实验数据准确性

1. 样品处理

1.1 样品纯度：采用多种纯化方法相结合，如柱层析、凝胶过滤、透析等，确保多糖样品纯度足够高，避免杂质干扰NMR信号。

1.2 样品浓度：根据多糖的分子量和NMR仪器的灵敏度，精确配制合适浓度的样品溶液，一般为10-50mg/mL。

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1.3 样品均匀性：溶解样品时，需充分搅拌或超声处理，保证样品完全溶解且均匀分散，避免出现局部浓度不均或有未溶解颗粒的情况。

2. 仪器设备

2.1 仪器校准：定期对NMR仪器进行全面校准，包括磁场强度、频率、脉冲宽度等参数，确保仪器处于最佳工作状态。

2.2 磁场稳定性：配备高质量的磁场稳定系统，避免磁场漂移。同时，保持仪器室的温度和湿度恒定，防止因环境因素影响磁场稳定性。

3. 实验操作

3.1 溶剂选择：优先选用重水（D2O）或氘代氯仿等氘代溶剂，减少溶剂信号对多糖信号的干扰。

3.2 实验参数优化：根据多糖的结构特点和实验目的，合理设置扫描次数、扫描范围、弛豫时间等参数。

3.3 操作人员技能：操作人员需经过专业培训，熟悉NMR仪器的操作流程和注意事项，严格按照标准操作规程进行实验，减少人为误差。

4. 数据处理

4.1 基线校正：对原始谱图进行基线校正，消除由于仪器噪声、样品不均匀等因素导致的基线漂移，使谱图更准确地反映样品的真实信号。

4.2 信号归属：结合多糖的化学结构知识和文献报道，准确归属NMR谱图中的各个信号峰，避免误判。

4.3 重复实验：进行多次重复实验，取平均值或进行统计分析，评估数据的重复性和可靠性。

本篇文章对科研爱好者有一定参考价值。但它不能替代专业领域更详尽、精准且深入的专业知识体系，也不等同于实际实验操作流程。若阅读时发现侵权或争议内容，请立即联系作者删除，以保文章合法性与合规性，维护良好科研交流环境。

️参考文献

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[3] 张宁,刘咏,张超,等.三棱多糖RSB-4结构表征及抗炎活性研究[J].合肥工业大学学报(自然科学版),2024,47(06):796-802.